Toisaalta hyvä C57BL/6 -historia voi olla yleinen, koska se on ylivoimaisesti yleisimmin käytetty sisäsiitoiset laboratoriosuodattimet ja enemmän kuin CRISPR -suunnittelulaitteiden leikki C57BL/Six: llä resurssigenomin jälkeen. Suurin osa genomisarjan ohjeista luovuttaja -DNA: https://onlinekasinolla.com/leovegas-casino/ n luomiseksi voidaan saada uuden hiiren genomisekvensointikonsortion (MGSC) takia. Jokaisen keskittyneen asennuksen sijainti tulisi testata huolellisesti, jotta ei ehkä estä ihmisiä, jotka säätelevät ongelmia. Jopa CRISPR: n jälkeen suuria kuin 5 kb: tä on vaikea tuottaa hiirten sisällä.
Sisältää ehdollisen poistoalleelin tuottamiseksi yksi pitkä SS -luovuttaja -DNA, joka sisältää erinomaisen floxed -eksonin/s voi suorittaa tehokkaammin kuin pelaaminen muutamalla SGRNA: lla, jotta voit lähettää samanaikaisesti loxp -Internet -sivustot. SGRNA: ien validointi testataan lihasyhdistyksessä, jos hiiren zygootin todellisia vaatimuksia ei kuitenkaan vastaa, jos luovuttajien hiiriä omaan hiiren blastosystianalyysiin ei tarjota (Ran et al., 2013a). Parece -soluja, mukaan lukien (Wang et al., 2013; Yang ym., 2013), voidaan käyttää genomimodifiointiehokkuuden päättämiseen esimerkiksi siksi, että Parece -kudoksessa on parhaat HDR -tehokkuudet kuin somaattiset lihakset (Yu et al., 2015).
Päivänäkökohdat
SGRNA: n suorituskyvyn lisäksi jonkin muun ahdistuksen genomimodifioinnista „potentiaali pois kohdemutaatioista, varsinkin jos etsit perehtyä erinomaiseen hiiren fenotyyppiin. Suurin osa Cripsr SGRNA -rakenteen sovelluksesta tarjoaa luettelon potentiaalista pois osoituspaikoista, joten jos mahdollista, erinomainen PCR-perustettu menetelmä todennäköisesti auttaa sinua sijoittamaan indel-mutaatiot näiden sivustojen aikana, jotka pelaavat kemiallisella epäsuhta-määrityksellä. Kasvatus, jotta voit „puhdasta“ villi-asuntoa hiirestä, joka todennäköisesti esitetään auttamaan sinua erottamaan ihmiset epätoivotut mutaatiot (mieluiten ainakin kaksi ristiä tulee minimoimaan kohteen mutaatioista) (Raveux et al., 2017).
2 Aseta ja rakenna lineaarinen substraatti PCR: llä
Superovulaation standardien muutos ja voit kuitenkin Zygote -alueen, jota tarvitaan joitain muita haasteita käytettäessä (Qin et al., 2016). SGRNA: n alku ja voit CAS9-mRNA: n hiiren zygootin kannalta mahdollisesti sytoplasmisen laukauksen ansiosta, yleensä leikkimään hyvän pietsopohjaisen mikromanipulaattorin tai pronukleaarisen injektion takia, jolla on yleensä suuri mikroinjektori (Yang et ai., 2014). Yleensä nolla fenotyyppisiä eroja on havaittu joskus alun kanssa (Horii et al., 2014).
Genomin muokkaamiseksi nisäkkäiden kudoksen sisällä, tämäntyyppiset indelit todennäköisesti poistuvat geenin A-kehyksen siirtymän mutaation seurauksena. Jos luovuttaja -DNA voidaan saada, tuore DSB korjataan todennäköisesti HDR: llä, vaikkakin alemmasta säännöllisyydestä kuin yksinkertaisesti NHEJ. CRISPR-Cas9 on myöhemmin sopeutettu geneettiseen manipulointiin kokonaan koiriin, esimerkiksi koputuksen tuottamiseksi ja koputtavat rottia.
Rekombinointia voidaan käyttää myös deleetioihin, leikkausmutaatioihin, päällekkäisyyksiin, inversioihin, fuusioihin ja tunnisteisiin. Suuri lineaarinen DNA -substraatti, joka sisältää halutun muutoksen, muuten homologiat yrittävät tuoda kohde -DNA: ta kudoksiin. GAM: ää ei varmasti tarvita rekombinointiin, mutta edistää dsDNA: n rekombinaation esiintymistiheyttä yhtä paljon kuin 20-bend. EXO on oikeastaan erinomainen 5 ‚→ 3‘ kaksois-DNA-spesifinen eksonukleaasi, jota tarvitaan dsDNA-rekombinaatioon. Tuore beeta -terveellinen proteiini, erinomainen ssDNA: n hehkutusproteiinit, on tärkein rekombinaasi rekombinoivan sisällä. Merkittävää on, että isäntärekombinaatiopalvelut, esimerkiksi salaiset rekombinaatioproteiinien RECA, eivät tarvitse rekombinointia varten.
LOXP -verkkosivuilta olevan järjestelyn mukaan uusimmat rekombinaatiotarvikkeet poistot tai oman osoitegenetiikan käännökset. CRE-LOXP: n indusoitavien ominaisuuksien seurauksena uusin lyöminen voidaan indusoida kemiallisista aineista, esimerkiksi tetrasykliinistä ja sinä tamoksifaani. Tetrasykliin muodostuu tuoreen CRE -rekombinaasin transkription laukaisun sisällä, kun taas tamoksifaani vastaa atomikuljetusta. Jäljellä olevien alukkeiden tarkoituksena on luoda tuote tai palvelu, jossa indel sijaitsee epäsymmetrisesti uusimmassa PCR -yksikössä. Sitten yksi epäsuhta pilkotaan T7E1 -kemikaalilla (WT – villityyppi; HT – heterotsygoottinen) muutaman lyhyemmän fragmentin luomiseksi Keen -agaroosiliuokseen.
Vaikka Olivares muuttaa rintaansa mennäkseen Castillon oikean puolen tuoreeseen taisteluun, Castillo’s Overhand Right toimii A-kehyksenä lopettaa Olivares pois Underhook-saamisesta. Asennettuun vartalotyyppiin Castillo asettaa innostuneen yläosan tuottamaan tilaa, jotta he voivat purkaa taskustaan, nollatakseen hyvään etäisyyteen.Kuitenkin, kun Olivares ei pystynyt menemään taisteluun suositulle etupuolelle, hänen kykynsä pelata jäljellä olevalla linkillään on rehellisesti vähentynyt.
Suurten deleetioiden lisäksi korkeat genomiset insertiot tarjoavat myös myös olevan mahdollista pitää hauskaa CRISPR: n kanssa (Zhang et al., 2015). Kaksois-SGRNA: n injektio on lisäksi ollut ihanteellinen keinot parantaa tuoreen geenin todennäköisyyttä, etenkin kun bi-allelic-geenimuutos on tosiasiallisesti toivottavaa (Zhou et al., 2014). Ilmoitusmutaatioista oli enimmäkseen keskusteltu CRISPR: n genomin modifiointien omistuksessa ihmisen sairauden soluissa, mutta siitä voi tulla epätavallisia erinomaisessa hiiren zygootissa (Fu et al., 2013; Yang ym., 2013). Silti kohteen ulkopuoliset mutaatiot ovat edelleen ongelma tarkasteltaessa geneettisesti suunnitellut hiiret. Vain yksi Cas9N -viiva myötävaikuttaa vain yhteen helpoihin korjattuun merkkijonoon; Varsinaisen DSB: n tekemiseksi pari SGRNA: ta on välttämätöntä. CRISPR-Cas9-tekniikka tarjoaa suurelta osin korvattujen geenien, jotka keskittyvät ES-kudokseen, koska genomin tapa modifioida hiirissä, mukaan lukien yksinkertaisen rakenteen takia ja pienempi lähde, jota tarvitaan keksijärotien saamiseksi.
- Sen jälkeen kun Duran -kaupungit ovat hänen päänsä Palominon ylin kunnianosoituspuolella, Palomino kamppailee heittääkseen oikean koukun suoraan.
- Innostunut ECORI -verkkosivut tuhoutuvat oman luovuttaja -DNA: n asentamiseen CRISPR -tuotetun Knockin -hiiren genotyypin tukemiseksi, jossa LSO ei leikkaa ki pcr -rengasta.
- Korkeat insertiot muuten deleetiot saattavat kuitenkin vaatia muutamia SGRNA: ita kattavaan kokonaan genomista DNA: ta pitkin, jotta ne voidaan korvata tai päästä eroon.
- Ehdolliset hiirikuviot yrittävät suosia henkilöongelman tutkimuksessa, koska molemmat ehdottavat fenotyypin samankaltaisuutta, kun olet erityinen genetiikka.
- 1 – DOS KB: n insertit tehtiin CRISPR: llä, mutta HDR: n kokonaistulos minimoi yleensä, kun koot uusimmat pääsyn mitat kasvavat sen pituuden yli.
CAS9: n DNA: n endonukleaasikapasiteetin lisäksi CRISPR oli myös uusiutunut innostuneiden RNA -LED -tilan tarjoamiseksi aivan uuden transkriptionaalisen toiminnan hallinnasta keskittyneestä genetiikasta. Se saavutetaan pelaamalla deaktivoidulla CAS9: llä (DCAS9), joka on sitoutunut, jotta voit transkriptionaaliset aktivaattorit, repressorit, ja voit epigeneettisiä muokkaimia (Komor ym. 2017). Sen sijaan kohdegeenin aktivaatio, jolla on hullu tyyppi CAS9, saavutetaan käyttämällä muuttuneita kuolleita SGRNA: ita, jotka on rakennettu MS2 -hiusneula -aptameereilla.Nämä kuolleet SGRNA: t ovat tosiasiallisesti vähentyneet DSB: n muodostumisen välttämiseksi, kun taas MS2 -aptameerit tuottavat sekoituksen terveellisen proteiinin, joka koostuu uudesta MS2 -bakteriofagipinnoitteesta tarvittava proteiini, joka liittyy suureen transkriptionaaliseen aktivaattoriin (Liao et al 2017). Joten se käsittelee geenin aktivointistrategiaa on osoitettu rotilla ajaakseen suunnatun termin pois perheen geeneistä, jotka on osoitettu auttavan lieventämään sairautta, mukaan lukien kaikki diabeteksen muodot, munuaistilanne ja voit lihasdystrofiaa.
Nämä geenit keskittyvät prosesseihin yhdessä CRISPR-Cas9-tekniikan lopullisen kehityksen kanssa riittävän nopeampaa aikaa geneettisesti suunniteltujen hiirten viljelyyn 8–10 päivästä 3 kuukaudessa. CRISPR-CAS9 Tekninen on kuitenkin pääosin korvannut ZFN: t ja sinä tiivisee helpompaa rakennetta ja rakentamista (kuva 1).ZFN: t ja sinä tiivynit vaativat multimeeristen DNA: n sitoutumisdomeenien asennuksen jokaiselle tuoreesta genomisesta kohteesta. CRISPR käyttää erinomaisen ribonukleoproteiinin muodostumista DNA-endonukleaasi CAS9: n välillä ja voit erinomaisen “opas” RNA: n toimittaa, missä suuri genominen DSB tapahtuu pelaamalla 20BP: n päässä vastaavasta täydentävästä peräkkäisestä peräkkäisestä.